1 Pozadina epidemije denge: Eskalacija globalnog izazova javnog zdravlja

Denga groznica je akutna virusna bolest koju prenose komarci, a uzrokuje je virus denge (DENV), koji se pojavio kao najbrže šireća arbovirusna bolest u svijetu, predstavljajući značajnu prijetnju sigurnosti javnog zdravlja. Tokom protekle dvije decenije, globalna incidencija denge se dramatično povećala, a broj prijavljenih slučajeva se udvostručuje godišnje od 2021. godine [1]. U decembru 2023. godine, Svjetska zdravstvena organizacija (WHO) proglasila je globalnu vanrednu situaciju zbog denge kako bi ojačala koordinirane međunarodne napore u odgovoru. Epidemiološke procjene WHO pokazuju da je približno 3,9 milijardi osoba širom svijeta u riziku od infekcije dengom, s procijenjenih 390 miliona infekcija koje se javljaju godišnje - od kojih se 96 miliona prezentira kao klinički očigledni slučajevi [1,2].

2 Epidemiološka naglaska

Epidemiološke karakteristike denge oblikovane su interakcijom viroloških faktora, vektorske ekologije, imunološkog odgovora domaćina i socio-ekoloških uslova. Sveobuhvatno razumijevanje ovih karakteristika je ključno za razvoj efikasnih strategija prevencije i kontrole, kao i tačnih dijagnostičkih pristupa.

2.1 Vektori prenosa i obrasci prenosa u urbanim sredinama

Virus denge se prvenstveno prenosi putemAedes aegypti i Aedes albopictuskomarci. Među ovim vektorskim vrstama, Aedes aegypti je prepoznat kao najkritičniji vektor prenosa, karakteriziran visokom "ljudskom prilagodljivošću" i širokom rasprostranjenošću u tropskim i suptropskim urbanim okruženjima. Za razliku od drugih komaraca vektora arbovirusnih patogena, Aedes aegypti pokazuje sljedeće ključne epidemiološke karakteristike:

-Sklonost za razmnožavanje u antropogenim okruženjima (npr. spremnici za vodu, odbačene gume)

-Snažan tropizam za ljudsku krv kao izvor hranjivih tvari

- Dnevno ponašanje tokom hranjenja

Ove osobine definiraju dengu kao tipičnu"urbana zarazna bolest"sa značajno povećanom efikasnošću prenosa u gusto naseljenim područjima. Studije SZO su pokazale da u gusto naseljenim urbanim okruženjima, povećana učestalost kontakta komaraca i ljudi može značajno povećati osnovni reprodukcijski broj (R₀) DENV-a, čime se ubrzava širenje epidemija [2].

2.2 Globalni trendovi širenja i pokretački faktori

Prema izvještajima SZO, globalni broj prijavljenih slučajeva denge eksponencijalno se povećao u posljednje dvije decenije [1,3]. Ovaj uzlazni trend prvenstveno je uzrokovan sljedećim međusobno povezanim faktorima:

(1) Klimatske promjene: Rastuće globalne temperature ne samo da proširuju geografski raspon pogodnih staništa za komarce vektore, već i skraćuju vanjski inkubacijski period DENV-a unutar komarca domaćina, čime se povećava efikasnost prenosa. SZO je potvrdila da su varijacije u gustoći komaraca izazvane klimom pouzdan prediktor prostorno-vremenske dinamike epidemija denge.

(2) Urbanizacija: Brzo i neplanirano širenje gradova stvorilo je obilna staništa za razmnožavanje komaraca vektora, dok je povećana gustoća naseljenosti ojačala kontinuitet lanaca prenošenja DENV-a.

(3) Globalno kretanje stanovništva: Međunarodna putovanja i trgovina olakšali su brzi prekogranični prijenos denga groznice (DENV), promovirajući prelazak s uvezenih slučajeva na održivi lokalni prijenos. Podaci nadzora SZO pokazuju da su između 2010. i 2021. godine Sjedinjene Američke Države prijavile 7.528 slučajeva denga groznice povezanih s putovanjima, među kojima je 3.135 zahtijevalo hospitalizaciju, a 19 je rezultiralo smrtnim ishodom.

(4) Širenje distribucije vektora: Globalno, geografski raspon Aedes aegypti i Aedes albopictus nastavlja se širiti, a komarci Aedes se sve više naseljavaju u dijelovima Evrope. Posljedično, denga se razvila od tradicionalno regionalne epidemije do globalne prijetnje javnom zdravlju.

2.3 Ko-cirkulacija više serotipova i mehanizmi reinfekcije

Virus denge sadrži četiri antigenički različita serotipa (DENV-1 do DENV-4). Infekcija jednim serotipom daje dugoročni zaštitni imunitet protiv tog specifičnog serotipa, ali samo privremenu i djelomičnu unakrsnu zaštitu protiv ostala tri serotipa. Opšta populacija je univerzalno podložna DENV-u, pri čemu samo podskupina zaraženih osoba razvija kliničku bolest [2].

U endemskim regijama, više serotipova DENV-a često kocirkulira istovremeno, što rezultira mogućnošću da pojedinci dožive više infekcija denga groznicom tokom svog života. Epidemiološke studije SZO su identificirale ko-cirkulaciju više serotipova kao ključni pokretač periodičnih epidemija denga groznice [1].

2.4 Sekundarna infekcija i pojačanje zavisno od antitijela

Kritičan i jedinstven fenomen u epidemiologiji denge jepojačanje zavisno od antitijela (ADE)Tokom sekundarne infekcije heterolognim DENV serotipom, neneutralizirajuća antitijela proizvedena tokom primarne infekcije olakšavaju ulazak virusa u monocite i makrofage, čime se pojačava replikacija virusa. Ovaj mehanizam je široko prepoznat od strane SZO kao glavni patogeni faktor u teškom obliku denge, uključujući hemoragijsku dengu groznicu i sindrom denge šoka [1].

Epidemiološki podaci SZO dosljedno pokazuju da osobe sa sekundarnom infekcijom denga groznicom imaju značajno veći rizik od razvoja teške bolesti u poređenju sa onima sa primarnom infekcijom - karakteristika koja je od velikog značaja za praćenje bolesti i kliničko liječenje. Važno je napomenuti da, iako je rizik od teške bolesti povećan tokom sekundarne infekcije, infekcija bilo kojim DENV serotipom može potencijalno napredovati do teške denga groznice [1].

2.5 Nespecifične kliničke manifestacije i rizik od pogrešne dijagnoze

Kliničke manifestacije denge su primjetno nespecifične, posebno u ranim fazama bolesti, često se preklapajući s manifestacijama drugih virusnih infekcija koje prenose komarci (npr. čikungunja i Zika virusi), kao i određenih respiratornih infekcija. Procjene SZO pokazuju da je 40-80% DENV infekcija asimptomatsko [3].

Tipične kliničke manifestacije uključuju:

-Akutna groznica (traje 2-7 dana, može biti dvofazna)

- Jaka glavobolja i retroorbitalni bol (bol iza očiju)

- Bol u mišićima i zglobovima (obično poznat kao "groznica prijeloma kostiju")

- Makularni ili makulopapularni osip

- Blage hemoragijske manifestacije (npr. ekhimoza, epistaksa, krvarenje desni)

Simptomatska denga groznica se obično dijeli na tri različite faze: febrilnu fazu, kritičnu fazu i fazu oporavka. Otprilike manje od 5% simptomatskih pacijenata progredira do teškog oblika denge. Zbog nedostatka specifičnih kliničkih karakteristika, dijagnoza zasnovana isključivo na kliničkim simptomima je teška, što povećava rizik od pogrešne dijagnoze i nedovoljne dijagnoze. SZO eksplicitno naglašava da sama klinička dijagnoza nije dovoljna da bi se osigurala tačnost, što laboratorijsku potvrdu čini neophodnom [1].

 3 ključne tačke iz dokumenta SZO „Laboratorijsko testiranje na virus denge: Privremene smjernice, april 2025.“

U aprilu 2025. godine, Svjetska zdravstvena organizacija objavila je ažurirane privremene smjernice o laboratorijskom testiranju na dengu, pružajući autoritativne tehničke smjernice za globalnu dijagnozu denge. Ove smjernice sintetiziraju najnovije dokaze o laboratorijskom testiranju denge u kontekstu tekuće globalne vanredne situacije s dengom i nude praktične preporuke prilagođene okruženjima s različitim nivoima resursa.

3.1 Osnovni principi strategije testiranja

Smjernice naglašavaju da dijagnoza denge groznice mora usvojiti strategiju kombinovanog testiranja više markera zasnovanu na stadiju bolesti [1]. S obzirom na odsustvo univerzalnog dijagnostičkog algoritma, strategije testiranja treba prilagoditi lokalnim epidemiološkim kontekstima, uzimajući u obzir sljedeće ključne faktore [1]:

- Stadij infekcije: Broj dana nakon pojave simptoma određuje najprikladniju metodu testiranja

-Vrsta uzorka: Pogodnost pune krvi, plazme ili seruma za detekciju DENV-a

-Regionalna epidemiologija: Lokalno cirkulirajući serotipovi DENV-a i ko-cirkulacija drugih arbovirusa

-Rizik od koinfekcije: U regijama s preklapajućom cirkulacijom arbovirusa, treba razmotriti multipleks testiranje kako bi se razlikovali različiti patogeni.

3.2 Strategija testiranja zasnovana na fazama

Prema smjernicama SZO, laboratorijsko testiranje denge treba slijediti jasne vremenske okvire na osnovu stadija bolesti [1,2]:

(1) Testiranje akutne faze (≤7 dana nakon početka)

-Testiranje nukleinskih kiselina (molekularno testiranje): Reverzna transkripcija-lančana reakcija polimeraze (RT-PCR) i druge molekularne metode detektuju DENV RNK sa visokom osjetljivošću.

-Testiranje antigena: Detekcija NS1 antigena, koji postaje detektabilni unutar 1-3 dana nakon početka bolesti.

Tokom akutne faze, nivoi viremije su relativno visoki, a testiranje nukleinskih kiselina i antigena postiže optimalnu osjetljivost.

(2) Testiranje u fazi oporavka (≥4 dana nakon početka)

-Serološko testiranje: IgM antitijela obično postaju detektabilna oko 4. dana nakon početka bolesti.

U većini slučajeva, IgM antitijela perzistiraju 14-20 dana, a u nekim slučajevima perzistencija može trajati i do 90 dana.

Testiranje IgG antitijela ima ograničenu vrijednost za dijagnozu akutne denge zbog potencijalnih unakrsno reaktivnih antitijela iz prethodne infekcije flavivirusom ili vakcinacije.

(3) Algoritam za dijagnostiku sumnjivih slučajeva

Smjernice uključuju dijagnostički algoritam za sumnjive slučajeve denge, preporučujući odgovarajuće metode testiranja na osnovu dana nakon pojave simptoma: testiranje NS1 antigena i testiranje nukleinskih kiselina su primarni pristupi u ranoj fazi, dok je serološko testiranje primarna metoda u kasnijoj fazi.

3.3 Evaluacija i odabir performansi metode ispitivanja

Prema SZO, sistematska evaluacija performansi i primjenjivih scenarija različitih testova na dengu su sljedeći:

4 Preporuke za makro i mikrotestiranje proizvoda za detekciju denge po scenariju

Kako bi podržao prevenciju i kontrolu denge, Macro & Micro-Test pruža integrirani dijagnostički portfolio koji obuhvata brzi skrining, molekularnu potvrdu i genomski nadzor, zadovoljavajući potrebe u različitim fazama upravljanja epidemijom.

4.1 Scenarij 1: Brzi skrining i ciljani nadzor

Primjenjivo u klinikama za povišenu temperaturu, ustanovama primarne zdravstvene zaštite, skriningu u zajednici za vrijeme izbijanja epidemije i karantinu u lukama/na granicama.

-Brzi test za antigen virusa denge NS1: Otkriva ranu infekciju (1-3 dana nakon početka) s rezultatima za 15 minuta za brzu trijažu.

-Test antitijela IgM/IgG protiv virusa denge: Razlikuje primarne/sekundarne infekcije kako bi se procijenio rizik od teške bolesti.

- Kombinirani brzi test za antigen NS1 virusa denge + IgM/IgG: Istovremeno detektuje antigen i antitijela za potpunu dijagnozu.

-Test antitijela IgM/IgG na virus čikungunje: Omogućava diferencijalnu dijagnozu s dengom kako bi se precizno identificirali patogeni.

4.2 Scenarij 2: Precizna dijagnoza i hitni odgovor

-Komplet za detekciju nukleinskih kiselina virusa denge I/II/III/IV: Detektira i diferencira 4 serotipa (granica detekcije 500 kopija/mL) za praćenje epidemije.

-Liofilizirani PCR komplet za virus denge: Može se prenositi na sobnoj temperaturi, pogodan za područja s ograničenim resursima i iznenadne epidemije.

-Dengue/Zika/Chikungunya Multiplex PCR komplet u realnom vremenu: Istovremeno detektuje 3 arbovirusa za efikasnu diferencijalnu dijagnozu kod složenih epidemija.

Svi gore navedeni reagensi su kompatibilni sa AIO 800 potpuno automatiziranim sistemom za određivanje uzorka do odgovora, što smanjuje ručni rad i unakrsnu kontaminaciju, te poboljšava efikasnost i biosigurnost.

4.3 Scenarij 3: Genomski nadzor i analiza virusne loze

Primjenjivo na nacionalne referentne laboratorije, istraživačke institucije javnog zdravstva, u skladu s pozicioniranjem NGS-a od strane SZO.

Macro & Micro-Testova rješenja za genomski nadzor podržavaju sekvenciranje cijelog genoma za praćenje virusa, razjašnjenje lanca prijenosa, praćenje varijanti i prilagođavanje strategije vakcinacije. Podržavaju ručne/automatizirane tokove rada, poboljšavajući protok i ponovljivost, omogućavajući laboratorijama da pređu sa rutinskog testiranja na napredni nadzor, u skladu s naglaskom SZO na jačanju praćenja evolucije virusa.

4.4 Vrijednost integriranih rješenja

Macro & Micro-Test pruža kompletna dijagnostička rješenja za detekciju arbovirusa, podržavajući svaku fazu upravljanja epidemijama: alate za brzi skrining za zdravstvene ustanove na prvoj liniji, molekularnu potvrdu za preciznu dijagnozu i mogućnosti analize cijelog genoma za epidemiološki nadzor. Zahvaljujući visokoučinkovitim testovima, fleksibilnim radnim procesima i platformama spremnim za automatizaciju, ova rješenja osnažuju laboratorije i javnozdravstvene sisteme da ojačaju spremnost i odgovor na nove arbovirusne prijetnje širom svijeta.

Reference

[1] Svjetska zdravstvena organizacija. Laboratorijsko testiranje na virus denge: Privremene smjernice, april 2025. Ženeva: Svjetska zdravstvena organizacija; 2025.

[2] Tehnička savjetodavna grupa Globalne inicijative za arbovirus SZO. Jačanje globalne spremnosti i odgovora na prijetnje arbovirusnim bolestima: Poziv na akciju. Lancet Infect Dis. 2026;26(1):15-17.

[3] The Lancet Microbe. Prevazilaženje dileme dijagnostike denge. Lancet Microbe. 2025;6(7):101190.